膠原酶 來(lái)源于溶組織梭菌
膠原酶已被用于制備動(dòng)脈組織，用于研究晚期糖基化終產(chǎn)物（AGE）。該酶還與其他蛋白酶一起用于人腫瘤、小鼠腎、人腦、肺上皮和許多其他組織的解聚。它在肝臟和腎臟灌注研究，胰腺消化和非實(shí)質(zhì)肝細(xì)胞的分離中也是有效的。該酶經(jīng)過(guò)了肝細(xì)胞釋放的適用性測(cè)試，針對(duì)每只大鼠肝臟的100 mL總體積中的濃度大約為1 mg/mL。
適用于制備用于測(cè)序的單細(xì)胞懸液。
生化/生理作用
組織溶梭菌產(chǎn)生兩類膠原酶。梭菌膠原酶比哺乳動(dòng)物膠原酶更高效。它在膠原三螺旋中的多個(gè)裂解位點(diǎn)進(jìn)行裂解。梭菌膠原酶與氣性壞疽中的細(xì)菌入侵有關(guān)。
從組織中進(jìn)行細(xì)胞的有效釋放需要膠原酶等的作用。每摩爾的膠原酶可被四克的鈣原子（Ca2+）所激活。培養(yǎng)濾液中被認(rèn)為至少含有7種分子量在68-130kDa之間的不同蛋白酶。最適pH為6.3-6.8。該酶通常用于消化組織樣品中的結(jié)締成分以釋放單個(gè)細(xì)胞。膠原酶處理可引起某些細(xì)胞的死亡。通常，使用0.1至5 mg/mL的濃度用于消化。反應(yīng)時(shí)間可從15分鐘至數(shù)小時(shí)，并在不引起過(guò)多細(xì)胞死亡的情況下達(dá)到令人滿意的細(xì)胞解離效果。優(yōu)選含有鈣和BSA的Krebs Ringer緩沖液，而且Zn2+是活性所必需的。
每摩爾膠原蛋白酶被4g原子鈣活化。 它被乙二醇-雙（β-氨基乙基醚）-N，NN′,N′-四乙酸，β-巰基乙醇、巰基乙酸和8-羥基喹啉抑制。
注意
以原包裝形式，該產(chǎn)品在-20°C下可穩(wěn)定保存6年。在37℃、50℃和-20℃下30天內(nèi)，F(xiàn)ALGPA或蛋白酶活性沒(méi)有損失。如果分液（10mg/mL）形式快速冷凍并且在-20℃下冷凍保存，粗膠原酶的溶液可保持穩(wěn)定。進(jìn)一步的凍融步驟會(huì)破壞溶液穩(wěn)定性。 當(dāng)在冰上保持時(shí)，該產(chǎn)品可在7小時(shí)內(nèi)保持100％活性。
單位定義
一個(gè)膠原蛋白消化單元（CDU）從牛跟腱膠原蛋白中釋放的肽鏈量和1.0 μ亮an酸，5小時(shí)，pH7.4,37℃，在鈣離子存在下的茚三酮顏色相同。一個(gè) FALGPA水解單元每分鐘，25℃，水解1.0 μmole 呋喃基丙烯酰-Leu-Gly-Pro-Ala。一個(gè)梭菌蛋白酶單元在DTT存在下，pH7.6,25℃，每分鐘水解1.0 μmole BAEE。
制備說(shuō)明
溶液通常是在TESCA緩沖液（含有50mM TES、0.36mM氯化鈣，37℃時(shí)pH 7.4）中按1-2 mg/mL進(jìn)行制備。
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